1. 产品概述
Angiotensin II human acetate（血管紧张素II人醋酸盐，目录号：KM8460）是一种血管收缩剂，是肾素/血管紧张素系统（RAS）的主要生物活性肽。Angiotensin II通过与G蛋白偶联受体（GPCRs）——血管紧张素II 1型受体（AT1R）和2型受体（AT2R）相互作用，在调节人类血压中发挥核心作用。该肽是研究高血压、血管重塑、心肌纤维化及内皮功能障碍的重要工具。
目录号：KM8460
靶点：AT1R / AT2R（G蛋白偶联受体）
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项目 |
说明 |
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说明 |
易溶于水，可溶于DMSO（建议现配现用） |
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分子量与性状 |
白色冻干粉；Sequence：Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe（DRVYIHPF） |
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储备液分装 |
用无菌水或缓冲液配制储备液，分装成小份，储存于-20°C或更低温度 |
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冻融 |
避免反复冻融；解冻后建议立即使用，不建议4°C长期存放已配制的工作液 |
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注意：Angiotensin II为肽类化合物，易被培养基中的内源性蛋白酶降解；长时间处理建议使用无血清培养基或添加蛋白酶抑制剂，并按需补充新鲜药物。 |
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2.作用原理
Angiotensin II通过以下机制发挥其生物学效应：
1. 血管收缩与血压调节：通过与AT1R偶联Gq/11蛋白，激活PLC-IP3通路，诱导血管平滑肌细胞内钙释放，产生快速、强效的血管收缩反应，是维持基础血压和细胞外液容量稳态的关键肽类介质。
2. 交感神经激活与中枢效应：刺激交感神经末梢释放去甲肾上腺素，增强外周血管阻力；同时作用于中枢神经系统，促进加压素释放和饮水行为。
3. 醛固酮合成与肾脏钠水重吸收：刺激肾上腺皮质球状带合成并释放醛固酮，增强肾脏远曲小管和集合管对Na⁺和水的重吸收，扩张血容量。
4. 血管重塑与纤维化：诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和迁移，增加成纤维细胞中I型和III型胶原合成，导致血管壁增厚、心肌纤维化及器官重构。
其他机制：
内皮功能与氧化应激：Angiotensin II通过NADPH氧化酶途径诱导活性氧（ROS）生成，降低NO生物利用度，导致内皮功能障碍；并通过LOX-1依赖的氧化还原敏感途径诱导内皮细胞毛细血管样结构形成。
细胞凋亡与炎症：在不同细胞背景下可诱导或抑制凋亡；同时激活NF-κB通路，促进炎症因子（如IL-6、MCP-1）表达，参与动脉粥样硬化和心肌重构。
3.细胞实验与处理流程
3.1 细胞铺板
将血管平滑肌细胞（如A7r5、原代VSMC）、人脐静脉内皮细胞（HUVEC）或心肌成纤维细胞接种至培养器皿中，使处理时的细胞融合度达到60–70%。
3.2 Angiotensin II处理
工作浓度：在培养基中将Angiotensin II稀释至0.1–1μM（常用范围）。
处理时间：根据细胞类型和实验目的，处理时间可在6–48小时之间调整；急性收缩实验通常为数分钟至数小时。
关键提示：肽类化合物易被蛋白酶降解，建议在无血清培养基中处理，或添加蛋白酶抑制剂 cocktail；每24小时更换一次含药培养基。
1. 在原代血管平滑肌细胞中，0.1μM Angiotensin II处理24小时后，细胞增殖率可提升。
2. 在内皮细胞（HUVEC）模型中，Angiotensin II暴露6–12小时即可观察到ROS水平升高、NO含量下降及管腔样结构形成增加。
注意：
溶剂对照：使用等体积的无菌水或培养基。
拮抗剂对照：AT1R阻断可使用氯沙坦（Losartan，预处理30分钟）；AT2R介导效应可使用PD123319（常用浓度1–10μM，预处理30–60分钟，需通过预实验确认在该实验体系中不对AT1R产生显著阻断）作为选择性拮抗剂。
常见问题与解决方案
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问题 |
可能原因 |
解决方案 |
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实验效果不稳定 |
肽类在培养基中被蛋白酶降解 |
使用无血清培养基或添加蛋白酶抑制剂；新鲜配制工作液，避免反复冻融 |
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细胞反应不一致 |
不同细胞系AT1R/AT2R表达水平差异大 |
实验前用qPCR或Western blot确认AT1R表达；根据细胞类型优化浓度（建议0.01–1 μM范围预实验） |
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长期处理失效 |
Angiotensin II溶液半衰期短，培养基中持续降解 |
每24小时更换含药培养基 |
4.血管紧张素II（AngII）渗透泵诱导小鼠主动脉瘤模型实验
4.1模型原理与局限性（操作前必读）
AngII持续输注通过诱导高血压、血管炎症、巨噬细胞浸润和基质金属蛋白酶（MMP）激活，导致主动脉中膜弹性纤维断裂、平滑肌细胞丢失和血管扩张。该模型不需开腹手术，操作相对简便，且能模拟高血脂、高血压等人类AAA危险因素，适合基因编辑小鼠的机制研究。
关键局限性：
（一）AngII模型病变部位不局限于肾下腹主动脉，常合并胸主动脉瘤或主动脉夹层；小鼠中AngII诱导的AAA主要发生于肾上主动脉区域，与人类AAA最常见于肾下腹主动脉有所不同。
（二）单纯AngII模型的动脉瘤破裂发生率中等，若研究终点涉及破裂，需考虑联合BAPN（赖氨酸氧化酶抑制剂）等改良方案。
4.2动物选择
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参数 |
推荐 |
说明 |
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品系 |
ApoE⁻/⁻ 或 Ldlr⁻/⁻ 小鼠（首选） |
高胆固醇血症背景对AAA形成有明确增强作用；野生型C57BL/6J在常规饮食下成瘤率较低 |
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性别 |
雄性 |
雌性对AngII诱导的AAA抵抗，发生率比雄性低5~10倍；若使用雌性，需充分预实验确认成瘤率 |
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周龄/体重 |
8~12周，20~26 g |
此窗口期模型稳定性和可操作性最佳 |
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饮食 |
ApoE⁻/⁻常规饮食即可成瘤；Ldlr⁻/⁻需高脂饮食（如42% kcal来自脂肪） |
Ldlr⁻/⁻在普通饮食下成瘤率不足，高脂饮食是标准配置 |
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每组样本量 |
建议 ≥10~15只 |
AngII模型异质性较高，需考虑动脉瘤发生率的不完全外显和破裂死亡造成的样本损失 |
4.3 试剂与材料
(1) AngII
(2) 无菌生理盐水（用于溶解AngII和填充假手术泵）
(3) 阿佛丁（目录号：KP13883/KP13889）（麻醉）
(4) 聚维酮碘(目录号：KM17209)、70%乙醇（术区消毒）
4.4耗材与设备
(1) ALZET渗透泵（泵送速率0.25μL/h，持续28天；填充体积约250μL）灌注针（filling tube）和1 cc注射器
(2) 小动物手术器械（眼科剪、止血钳、镊子、持针器、缝合钉/ wound clips）
(3) 恒温手术垫
(4) 小动物高频超声系统（如Vevo系列）及脱毛膏
4. 5AngII溶液配制与渗透泵填充
（一）剂量与用量计算
标准剂量：1,000 ng/kg/min，持续28天。这是ApoE⁻/⁻和Ldlr⁻/⁻雄性小鼠中产生最大AAA效应的经典剂量。
少数研究使用1,500 ng/kg/min或2,000 ng/kg/min以提高破裂率或成瘤强度，但不推荐作为初始方案，建议先以1,000 ng/kg/min建立基线。
每只小鼠所需AngII质量按以下公式计算：
所需AngII质量（mg）= 体重（kg）× 剂量（ng/kg/min）× 60 × 24 × 28 ÷ 10⁶
以25 g小鼠、1,000 ng/kg/min为例，28天约需 1.0 mg AngII（按体重增长1 g预留余量，实际配制时建议按每只1.1~1.2 mg备料，并额外多配10%~20%以补偿填充损耗）。
（二）溶解方法
1.将冻干的Angll小瓶在-20°C下保存。使用前将Angll小瓶平衡至室温
2.将计算好的Angll质量(称取至一个无菌塑料管中。注：请勿使用玻璃管进行溶解，因为Angll的水溶液对玻璃具有较强的结合亲和力。
3.向含有冻干AnglI的塑料管中加入计算好的无菌生理盐水体积，盖上管盖，并通过反复倒置充分混匀，直至溶液澄清。
（三）渗透泵填充
1. 佩戴无菌手套操作；手上的油脂转移到泵外壳会影响泵功能。
2. 取泵主体和流量调节器，分别称量空泵重量（记录至小数点后四位）。
3. 用灌注针连接1cc注射器，从对应小鼠的AngII分装管中吸取溶液，排尽气泡。
4. 灌注针插入泵主体，针尖不要紧贴泵底；缓慢推注，直至液体从泵口溢出形成液滴。
5. 插入流量调节器，直至调节器头部与泵体顶部无间隙。擦去溢出液体，再次称重，计算填充率。
6. 填充率（%）=（填充后重量 − 空泵重量）× 1,000 / 平均填充体积 × 100
7. 填充率＜95%提示可能存在气泡，必须重新填充。
8. 将填充好的泵放入标记试管中，调节器头部朝上，加入无菌生理盐水完全浸没，37℃过夜孵育（至少12小时） 完成预启动。
（四）渗透泵皮下植入手术
① 术前准备
术前至少1天对手术器械进行干热灭菌。术前将小鼠置于诱导室，使用阿佛丁腹腔注射使其麻醉（使用前请认证核对最低起效剂量，并进行预实验确定麻醉时长，若实验时间过长无法把握麻醉时长，可改为异氟烷辅助并配备相应的镇痛剂），确认足底反射消失后固定于手术台，眼部涂抹眼膏防止角膜干燥。术区准备与切口,选择肩胛间区（颈背部中线两侧）作为植入部位。剃毛范围约硬币大小，聚维酮碘擦拭后以70%乙醇擦拭三次。
② 囊袋制作与泵植入
在肩胛间区做约1~1.5 cm皮肤切口，用止血钳钝性分离皮下组织，制作一个略大于泵体的囊袋。囊袋不宜过大，否则泵体可能翻转或移位。将泵以流量调节器朝向尾侧的方向植入囊袋，确保泵体完全位于皮下。缝合切口，再次消毒。
③ 术后护理
将小鼠置于37℃恒温垫上直至苏醒，常规饮食饲养。AngII泵送作用约在植入后24小时开始，此前的术后恢复期有助于降低麻醉和手术应激与AngII效应的叠加。
④ 假手术对照与实验分组
假手术组（sham） ：植入填充无菌生理盐水的渗透泵，其余手术操作与模型组完全一致。这是区分“手术/泵植入本身效应”与“AngII特异性效应”的必要对照。
推荐分组：
假手术组（生理盐水泵）
AngII模型组（1,000 ng/kg/min）
待测干预组（AngII + 药物/基因操作）
若涉及基因敲除或药物干预，需同时设置相应的遗传对照或溶剂对照。
4.6监测时间轴与终点选择
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时间点 |
操作 |
目的 |
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术前 |
称重、基线超声测主动脉直径 |
个体基线值 |
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植入后3~7天 |
观察恢复、称重 |
确认手术耐受 |
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第14天 |
早期扩张评估（可选） |
早期扩张评估（可选） |
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第28天 |
终点超声 + 组织取材 |
标准终点 |
4.7超声监测（活体）
使用小动物高频超声在肾动脉上方测量腹主动脉最大内径。小鼠麻醉后腹部脱毛，每只小鼠每个时间点重复测量3次取平均值。同时可记录胸主动脉区域直径，以捕捉AngII模型中常见的胸主动脉病变。
AAA判定标准（二选一，建议统一使用同一标准）：
主动脉直径增加≥50%（相对于正常参考直径）
或局部扩张达到参考直径的≥1.5倍。
成瘤判定：
超声或离体测量满足直径≥1.5倍或增加≥50%，且EVG显示弹性纤维断裂（≥2级）。
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问题 |
可能原因 |
解决方案 |
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实验效成瘤率低 |
肽类在培养基中 雌性小鼠、野生型背景、剂量不足 |
改用雄性ApoE⁻/⁻/Ldlr⁻/⁻；确认泵填充率和泵送速率；Ldlr⁻/⁻确认高脂饮食 |
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组内直径离散大 |
AngII模型固有异质性；病变部位不一 |
增加样本量；统一测量肾上腹主动脉段；术前基线值校正 |
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小鼠中途死亡 |
主动脉破裂、麻醉/手术并发症 |
记录死亡时间与是否破裂；若破裂是研究终点，需预设生存分析；优化麻醉和术后保温 |
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泵未有效输注 |
填充率不足（气泡）、泵未预启动 |
严格执行填充率核查（≥95%）和37℃过夜预启动 |
首次建立该模型时，建议先用少量动物（每组3~5只）进行预实验，确认本实验室条件下的成瘤率和手术存活率，再进入正式实验。AngII批号、泵批号、小鼠亚系和饲养环境均可能影响模型表现，预实验数据是后续样本量估算和终点选择的直接依据。
4. 配套推荐产品
围绕肾素-血管紧张素系统（RAS）及心血管研究方向，凯库勒生物医药（KKL Med）推荐以下配套工具试剂：
● AT1R拮抗剂（药理对照）：氯沙坦钾（Losartan potassium），选择性AT1R阻断剂，用于拮抗Angiotensin II效应；建议预处理浓度1–10 μM。
● AT2R选择性拮抗剂：PD123319，AT2R选择性拮抗剂，用于区分AT1R与AT2R介导的不同生物学效应。
● 相关肽类工具：Angiotensin-(1-7)、Angiotensin III、Renin抑制剂等RAS通路系列肽，覆盖经典与非经典RAS轴研究。
● 纤维化检测试剂：TGF-β1重组蛋白、Smad通路抑制剂（SB431542）。
● 氧化应激工具：NADPH氧化酶抑制剂（Apocynin）、ROS检测探针、NO检测试剂，配套内皮功能障碍研究。
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KKL MED专注于高品质生化试剂与小分子工具化合物，提供目录号现货及定制合成服务。
本手册内容基于公开研究资料整理，仅供实验参考。具体实验条件需根据所用细胞系和实验体系进行优化调整。
